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一步法Western试剂盒(兔源一抗)图片
产品货号:
WE0298
中文名称:
一步法Western试剂盒(兔源一抗)
英文名称:
One-Step Western Kit HRP(Rabbit)
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是百奥莱博最新研发的Western Blot检测试剂盒,能够在1小时左右得到高质量的Western Blot结果,且操作简便、检测灵敏度高、背景低、不需再加入二抗、系统稳定性强。常规的Western Blot间接法检测过程(封闭、一抗结合和二抗结合)需要较长的时间,实验流程复杂且需要多步条件优化。胶上的蛋白转移到载体膜上后,使用试剂盒中的封闭液孵育5min,再用抗体反应液处理后的一抗孵育载体膜,经洗涤三次(每次5min)后,即可进行发光或显色检测。本试剂盒针对目的蛋白一抗为兔来源的实验系统使用。




组分规格
Blocking Buffer500mL
Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)5×1mL
Dilution Buffer500mL
Wash Buffer(10×)500mL

保存:2~8℃,避免冷冻。


  • 客户需自己准备兔来源的一抗。
  • 使用Blocking Buffer封闭液、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)抗体反应液(兔)、Wash Buffer(10×)漂洗液之前请充分混匀。
  • 漂洗液如在2~8℃保存时出现沉淀,请恢复到室温,把沉淀溶解后正常使用,1×漂洗液可在室温保存一个月。
  • 建议转膜完成后用丽春红等试剂染色,并把膜上多余部分剪去以增加试剂的使用效率。
  • 一抗和抗体反应液HRP(兔)需要通过预实验来确定最佳的稀释用量。
  • 抗体反应液HRP(兔)、抗体稀释液和抗体用量可根据膜的大小按比例放大或减少。
  • 加入一抗的抗体稀释液可以回收重复使用一次。特异性及亲和力低的抗体不建议重复使用。回收后抗体如在1~2天内使用放置在2~8℃,长期保存请在-20℃冻存,避免多次反复冻融。
  • 如果存在较高背景的情况,请调整抗体的用量,并增加洗膜次数。
  • 试剂盒内所有试剂请于2~8℃保存,避免冻融。



本制品适用于转膜完成后的封闭及抗体孵育步骤,以5cm×8cm膜为例:
  • 漂洗液准备:取10mL Wash Buffer(10×)用蒸馏水稀释至100mL,即为1×Wash Buffer,待用。每次洗膜用8~10mL。
  • 封闭:转膜完成后,将膜浸没到10mL Blocking Buffer中,室温封闭5分钟。
  • 漂洗:倒掉封闭液,加入8~10mL 1×Wash Buffer,于摇床上用较大速度漂洗1分钟。
  • 洗膜的同时可准备抗体孵育液:取Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)100μL到离心管中,加入兔源一抗3~10μg,枪头吸打至充分混匀,室温孵育5分钟。加入至10mL Dilution Buffer中,充分混匀。
    注意:
    • 一抗的用量也可根据抗体的稀释度来进行调整。以抗体的最终稀释度1:1000为例,取100μL抗体反应液HRP(兔)到EP管中,加入10μL一抗,加入到10mL抗体稀释液中,充分混匀,室温孵育5分钟。
    • 如果膜面积较小,可按比例减少抗体、反应液及稀释液的用量。
  • 完成步骤3后,倒掉漂洗液,将一抗、Antibody Pretreat Solution(HRP/Rabbit)及Dilution Buffer混合而成的抗体孵育液加到膜上(确保孵育液完全浸没膜表面),在摇床上以60rpm左右的速度室温孵育40分钟。
  • 弃去(回收)抗体孵育液,用配制的1×Wash Buffer漂洗3~5次,每次3分钟。
  • 进行后续检测。建议采用ECL或者DAB法进行检测。



问题可能原因解决方案
信号太弱或者
看不到条带
蛋白上样量太少进行SDS-PAGE电泳时加大上样量。
蛋白转膜效率太低优化转膜时间或者电流,确保转膜时膜与胶之间没有气泡。
一抗亲和力较低增加膜在溶液中的孵育时间或者增加抗
体浓度可以增加信号
一抗亲和力较低对于低亲和力抗体来说,减少洗膜时间可以增加信号。由每次10分钟,减少到每次5分钟可以增加信号。
背景偏高一抗使用过量减少一抗的使用量。
一抗有非特异性结合或者
与封闭试剂有交叉反应
使用和二抗来源一致的血清或者无IgG的BSA。
洗膜时间太短增加洗涤的步骤可以进一步的降低背景。
曝光显影时间过长减少曝光时间。如果信号和背景都高,可以等待一段时间
,等背景信号减弱后,再进行曝光。
容器或者试剂被污染每次洗涤的时候使用清洁的容器。带手套,使用清洁的镊子处理膜。

相关搜索:一步法Western试剂盒(兔源一抗)一步法WB试剂盒一步法Western试剂盒通用型WB试剂盒One-Step Western Kit HRP(Rabbit)
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